動(dòng)物模型構建平臺

子宮內膜異位癥模型

  子宮內膜異位癥( endometriosis,EM)是子宮內 膜腺體和間質(zhì)種植于子宮以外的一種慢性、雌激素 依賴(lài)性疾病, 在育齡期女性中發(fā)病率為 10% ~ 15%  。 EM 雖是一種良性疾病,卻具有發(fā)病范圍 廣、癥狀多樣、易轉移、易復發(fā)的惡性行為,至今其 病因及發(fā)病機制仍不清楚。 目前 EM 的治療手段主 要包括手術(shù)和激素類(lèi)藥物,但療效均不理想。 因 此,子宮內膜異位癥是婦科學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn) 之一。然而,目前 EM 盆腔纖維化的形 成機制尚不清楚。 構建一種高效的子宮內膜異位癥動(dòng)物模型將 有助于對本病發(fā)病機制的認識和新藥的開(kāi)發(fā), 同時(shí) 可以為探索子宮內膜異位癥纖維化發(fā)病機制提供 理想模型。

 
1 實(shí)驗動(dòng)物
 SPF 級 6 周齡性成熟C57雌小鼠,體 重 18 ~ 20 g, 溫度 22 ~ 25℃ ,濕度 55% ~ 60%,12 h光照和12 h 黑暗交替,實(shí)驗前適應性飼養 1 周。

2 動(dòng)物造模準備
小鼠動(dòng)情周期檢測：小鼠適應性飼養一周后，取出每籠中小鼠，左手背位固定小鼠，觀(guān)察外陰情況；用20 μl移液器吸取無(wú)菌生理鹽水，輕輕插入小鼠陰道內，反復沖洗；獲得小鼠陰道脫落細胞懸液，涂片于載玻片上，進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色觀(guān)察。
動(dòng)情周期判斷：動(dòng)情前期(proestrus)：涂片可見(jiàn)有核的大圓形細胞，主要為上皮細胞。持續12-14小時(shí)；動(dòng)情期(estrus)，上皮細胞成熟，脫落，角質(zhì)化，大量堆疊，呈“落葉堆積”狀，無(wú)核多邊形細胞多見(jiàn)，間雜少量上皮細胞；動(dòng)情后期(metestrus)：上皮層變薄，白細胞浸潤，此期可見(jiàn)大量出現的白細胞，持續5-7小時(shí)；動(dòng)情間期(diestrus)：白細胞逐漸減少，此期可見(jiàn)白細胞、圓形上皮細胞及無(wú)核多邊形上皮細胞都可見(jiàn)。

3 子宮內膜異位癥造模
取出處于動(dòng)情間期的供體小鼠，使用戊巴比妥鈉（30 mg/kg）腹腔注射進(jìn)行麻醉，待小鼠完全麻醉后，使用剃毛刀將腹部剃毛，使用碘伏涂抹皮膚消毒，腹中線(xiàn)開(kāi)口，暴露子宮角；將子宮角切下，縱向打開(kāi)并對切下來(lái)的活組織切片剪成四塊（2×2 mm）；將處于動(dòng)情期受體小鼠戊巴比妥鈉腹腔麻醉（30 mg/kg），待小鼠麻醉后，將小鼠仰臥位固定，沿中線(xiàn)切口1 cm以暴露腹腔；子宮內膜異位癥小鼠使用供體的四個(gè)子宮碎片縫合到處于發(fā)情期小鼠的腹膜壁上；假手術(shù)小鼠：縫合大小相似的腹部脂肪碎片；使用8-0黑色絲線(xiàn)縫合移植的組織，腹肌和皮膚使用4-0縫合線(xiàn)縫合。慶大霉素2萬(wàn)U/只，皮下注射，連續3天。待小鼠蘇醒后正常飼養。

4  造模成功確認及分組
小鼠異位灶體積測量：小鼠建模4周后二次開(kāi)腹，使用游標卡尺測量并計算異位灶體積，記為異位灶體積1 (Volume-1)，計算公式為：異位灶體積=π/6×長(cháng)度×寬度×高度，確定造模成功。1. 1. 2 試劑與儀器
苯甲酸 β-雌二醇( Sigma,E2758),實(shí)驗用芝麻油(Acros organics,241002500)
兩套眼科常規手術(shù)器械(剪刀、鑷子、止血鉗)、 注射用生理鹽水、1 mL 注射器、20 mL 注射器等。
 

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