動(dòng)物模型構建平臺

裸鼠腫瘤模型是比較常見(jiàn)和常用的一種腫瘤動(dòng)物模型，它在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠腫瘤模型的接種一般有細胞接種和瘤塊接種兩種方式，接種取材有手術(shù)活檢標本、癌性胸腹水標本和體外培養的細胞系三種。
裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的優(yōu)點(diǎn)。
 
造模方法：
 
1、細胞是貼壁細胞，細胞培養在 RPMI-1640 培養基中，含 10%胎牛血清，100U/mL 的青霉素，100ug/mL 的鏈霉素，培養在 37℃含 5%CO2的細胞培養箱中。
細胞傳代培養：當細胞長(cháng)至 80-90%時(shí)，去除培養基，加入 PBS 洗 1-2 次，去除 PBS后，加入 1ml 胰酶消化 1-3min 后，加入 3ml 完全培養基中和胰酶終止消化，將消化的細胞轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。倒掉上清后，加入 3ml 培養基重懸細胞，1:3 傳代至培養皿中培養。
2、將長(cháng)到培養皿 80%-90%的細胞用胰酶消化下來(lái)，1000rpm 離心，去除上清，加入完全培養基重懸細胞，將細胞分別種在 6 孔板中，每孔種 1×105個(gè)細胞。
3、待細胞貼壁后，按照 MOI=1:10 的比例加入慢病毒感染細胞，感染 24h 后，去除含病毒的培養基，加入完全培養基。培養 48h 后，加入 puromycin 進(jìn)行篩選。
4、將細胞進(jìn)行擴增培養。待細胞長(cháng)到指定數量時(shí)，將細胞用胰酶消化下來(lái)，1000rpm離心后，去除上清，加入 PBS 將細胞洗一遍，再次加入 PBS 重懸，對細胞進(jìn)行計數，將數量調整為 2×107個(gè)細胞/ml。 
5、8周齡15只裸鼠適應性飼養7天后，隨機分為3組，每組分別在右腋皮下接種2×106（100ul/只）細胞（細胞分為對照組細胞即未處理的細胞，NC 組細胞即感染 NC 病毒的細胞，shRNA 細胞即感染 sh-RNA 病毒的細胞）。接種約兩周后出現腫瘤結節，每周用游標卡尺測量腫瘤大小兩次。將裸鼠放入鼠籠中正常飼養 4 周后處死裸鼠，取裸鼠腫瘤拍照凍存。

英瀚斯生物可承接各類(lèi)腫瘤模型實(shí)驗

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