細胞生物學(xué)平臺

MDC檢測方法

一、主要試劑材料

細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)（Solarbio，G0170）

DMEM（Hyclone，SH30023）

FBS（Hyclone，SH30070.03）

青鏈霉素（Hyclone，SV30010）

胰酶（Hyclone，SH30042.01）

PBS（南京生興，SN331）

CO₂培養箱（Thermo fisher，3131）

Confocal熒光顯微鏡（Zeiss，LSM710）

二、實(shí)驗方案

1、MG63及其耐藥株培養在含10%胎牛血清的DMEM完全培養基中培養，培養在37℃含5%CO₂的細胞培養箱中培養，當細胞增殖至80%-90%時(shí)，用胰酶將細胞消化下來(lái)，按照1:3比例傳代。

2、將1×10⁶個(gè)細胞種在3.5cm玻璃底培養皿中，將細胞放入培養箱中培養過(guò)夜后，分別加入miR-22、cisplatin、cisplatin和miR-22后，將細胞放入培養箱中培養12h、24h。

3、將細胞從培養箱中取出，去除培養基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。

4、加入適量MDC Stain，輕輕混勻。

5、室溫避光染色15～45min。

6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次，棄上清。

7、加入100μl的Collection buffer重懸細胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。

8、熒光顯微鏡下觀(guān)察(激發(fā)濾光片波長(cháng)355nm，阻斷濾光片波長(cháng)512nm)，拍照。