關(guān)于細胞培養的常見(jiàn)問(wèn)題
關(guān)鍵詞：細胞實(shí)驗外包 細胞培養 細胞實(shí)驗 第三方檢測機構 干細胞 細胞生物學(xué)
Q：培養液到底要不要加雙抗（青霉素&鏈霉素）？
A：雙抗不是細胞生長(cháng)必需的。我們培養細胞時(shí)不常規使用抗生素，因為連續使用抗生素會(huì )促進(jìn)抗生素耐藥性細胞株的產(chǎn)生，導致輕度污染持續存在。一旦將抗生素從培養液中去除，這種輕度污染最終將發(fā)展成為大規模污染。具體情況，可根據自己實(shí)驗室的環(huán)境，自行決定是否使用雙抗。
Q：細胞培養，能更換成其它種類(lèi)的培養基嗎？
A：我們強烈建議最好使用細胞提供機構或細胞庫推薦的生長(cháng)培養液。有些細胞可能會(huì )適應在不同培養基中生長(cháng)，在做好保種的條件下，可以分出部分細胞做測試。
Q: 細胞在培養過(guò)程中出現碎片如何處理？
A: 貼壁細胞在移除原培養液后，用 PBS 沖洗 2-3 遍；懸浮細胞離心移除原培養液后，加入 PBS 重懸，離心移除 PBS; 一般建議重復上述步驟 2-3 遍，用 800-1000rpm 離心 3-5 分鐘。
Q：細胞凍存能放在 -80℃ 保存嗎？
A：長(cháng)期保存的細胞應當放在液氮（-196℃）中保存，短時(shí)間（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。
Q：培養瓶是用密封蓋好，還是用透氣蓋好？
A：都可以。只是在使用密封蓋培養瓶時(shí)，瓶蓋旋至約 2/3，不要完全擰緊，預留約 1/3 以便細胞可以透氣；有些品牌的密封蓋培養瓶的瓶蓋上有適合位置指示標志。
Q:何謂 FBS,FCS,CS,HS?
A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之間沒(méi)有區別，都是指胎牛血清；FCS 不是正規命名，盡量不使用。Calf Serum（CS）則是指小牛血清。Horse Serum(HS)則是指馬血清。
Q:血清中可能出現的沉淀物是什么？
A:基于多年的實(shí)驗研究，用于細胞培養的胎牛血清以及其它血清中可能會(huì )存在以下種類(lèi)的沉淀物：
（1）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現的較大的沉淀物，可以達到 1-2mm，可以用肉眼觀(guān)察到。因為血清都是在低溫下進(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過(guò)程中仍然處于溶解狀態(tài)，當經(jīng)過(guò)最后的過(guò)濾分裝后，就會(huì )在瓶中凝結出現纖維蛋白沉淀。
（2）磷酸鈣，它也是常見(jiàn)的一種沉淀物，通常會(huì )使血清出現渾濁，并且在 37℃ 培養的時(shí)候會(huì )增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察像小黑點(diǎn)， 這些小黑點(diǎn)由于布朗運動(dòng)看上去可以活動(dòng)，因此經(jīng)常被誤認為是微生物污染。
（3）膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現沉淀物的常見(jiàn)原因。
Q:血清中的沉淀物對細胞培養有什么影響？
A:（1）細胞生長(cháng)，我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會(huì )影響細胞培養，我們的客戶(hù)以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。
（2）過(guò)濾，如果血清中出現大量的沉淀物，血清將很難過(guò)濾。一般說(shuō)來(lái)，因為在血清生產(chǎn)工序中已經(jīng)過(guò) 100nm 或者 40nm 的過(guò)濾處理，并且經(jīng)過(guò)了嚴格的無(wú)菌檢測，因此不推薦再過(guò)濾用于細胞培養 的血清。在實(shí)驗室中沒(méi)有必要再過(guò)濾處理血清，在大規模的細胞培養中往往將血清直接加到培養基中一起 過(guò)濾。
（3）污染，磷酸鈣往往被誤認為微生物污染而引起爭端。研究者可能會(huì )在血清中觀(guān)察到一些絮狀的 沉淀，因此就會(huì )比較警覺(jué)的去做無(wú)菌試驗，將血清放在培養箱中培養幾天，結果可能會(huì )觀(guān)察到更多的絮狀 沉淀，因此就斷定血清被污染了。并且當研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀(guān)察時(shí)往往可以看到一些可 以運動(dòng)的小黑點(diǎn)，因此就更加確認是血清被污染了。于是，研究者就會(huì )花費更多的時(shí)間和精力來(lái)和生產(chǎn)商 確認，但最終確定血清沒(méi)有被污染而只是沉淀。為了避免這些問(wèn)題的發(fā)生，我們建議不要直接將血清放在 培養箱中培養觀(guān)察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養以觀(guān)察是否有細菌生長(cháng)。另外，也可以進(jìn) 行革蘭氏染色，在油鏡下觀(guān)察，以確認是否有污染。
Q:如何避免血清中沉淀物的出現？
A:首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過(guò)程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動(dòng)血清。我們已經(jīng)發(fā)現在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應該盡量避免：
（1）熱滅活血清；
（2）在 37℃ 下培養血清；
（3）反復凍融；
（4）γ 射線(xiàn)照射；
（5）長(cháng)期儲存在 2-8℃；
（6）在室溫下放置時(shí)間過(guò)長(cháng)
Q:如何去除血清中的沉淀？
A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無(wú)菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養基 內一起過(guò)濾。
注意：不要以過(guò)濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。
相關(guān)文章：細胞生物學(xué)平臺 細胞流式分選 細胞轉染實(shí)驗 細胞分離培養
服務(wù)熱線(xiàn)
公司地址
地址：江蘇省南京市棲霞區和燕路371號 東南大學(xué)國家大學(xué)科技園科創(chuàng )樓A301
郵箱：order@enhancer-bio.com
24小時(shí)咨詢(xún)熱線(xiàn)