江蘇省南京市棲霞區和燕路371號 東南大學(xué)國家大學(xué)科技園科創(chuàng )樓A301
通便功能動(dòng)物實(shí)驗評價(jià)方法
1 實(shí)驗項目
1.1小腸運動(dòng)實(shí)驗
1.1.1實(shí)驗原理:
經(jīng)口灌胃給予造模藥物復方地芬諾酯或洛哌丁胺,建立小鼠小腸蠕動(dòng)抑制模型,計算一定時(shí)間內小腸的墨汁推進(jìn)率,來(lái)判斷模型小鼠胃腸蠕動(dòng)功能。
1.1.2實(shí)驗方法
選用成年健康雄性小鼠,體重在18-22g,每組10-15只。實(shí)驗設三個(gè)劑量組,一個(gè)陰性對照組,一個(gè)模型對照組,必要時(shí)設陽(yáng)性對照組。陰性對照組和模型對照組同樣途徑給溶劑。受試樣品連續給予時(shí)間7天,各組小鼠禁食不禁水 20小時(shí)。模型對照組和三個(gè)劑量組灌胃給予復方地芬諾酯5-6mg/kg BW,陰性對照組給蒸餾水。給復方地芬諾酯或洛哌丁胺0.5小時(shí)后,劑量組灌胃給予含相應濃度受試樣品的墨汁,陰性和模型對照組給墨汁灌胃。25分鐘后立即脫頸椎處死動(dòng)物,打開(kāi)腸腔分離腸系膜,剪取上端自幽門(mén)、下端至回盲部的腸管,置于托盤(pán)上,輕輕將小腸拉成直線(xiàn),測量腸管長(cháng)度為“小腸總長(cháng)度”,從幽門(mén)至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長(cháng)度”。
1.2排便時(shí)間、糞便粒數和糞便重量的測定
1.2.1原理:
經(jīng)口灌胃給予造模藥物復方地芬諾酯或洛哌丁胺,建立小鼠便秘模型,測定小鼠首粒排黑便排便時(shí)間、5或6小時(shí)內排便粒數和排便重量,來(lái)反映模型小鼠的排便情況。
1.2.2實(shí)驗方法
選用成年健康雄性小鼠,體重在18-22g,每組10-15只。實(shí)驗設三個(gè)劑量組,一個(gè)陰性對照組和一個(gè)模型對照組,必要時(shí)設陽(yáng)性對照組??瞻讓φ战M和模型對照組同樣途徑給溶劑。受試樣品連續給予時(shí)間7天,各組小鼠禁食不禁水 20小時(shí)。陰性對照組給蒸餾水,模型對照組和三個(gè)劑量組灌胃給予復方地芬諾酯10-12mg/kg BW。給復方地芬諾酯0.5小時(shí)后,陰性對照組和模型對照組小鼠用墨汁灌胃,劑量組灌胃給予含相應濃度受試樣品的墨汁,動(dòng)物單籠飼養,正常飲水進(jìn)食。從灌墨汁開(kāi)始,記錄每只動(dòng)物首粒排黑便時(shí)間、5或6小時(shí)內排便粒數及重量。
2 實(shí)驗原則
2.1 動(dòng)物實(shí)驗和人體試食實(shí)驗所列指標均為必做項目。
2.2 實(shí)驗中復方地芬諾酯或洛哌丁胺的造模劑量應通過(guò)預實(shí)驗確定。
2.3 除對便秘模型動(dòng)物各項必測指標進(jìn)行觀(guān)察外,還應對正常動(dòng)物進(jìn)行觀(guān)察,不得引起動(dòng)物明顯腹瀉。
2.4 排便實(shí)驗中模型成立的條件為排首粒黑便時(shí)間、5或6小時(shí)內排糞便重量和糞便粒數與陰性對照組差異均有顯著(zhù)性。
2.5排便次數的觀(guān)察時(shí)間實(shí)驗前后應保持一致。
3 動(dòng)物實(shí)驗結果判定
五到六小時(shí)內排糞便重量和糞便粒數任一項結果陽(yáng)性,同時(shí)小腸運動(dòng)實(shí)驗和排便時(shí)間任一項結果陽(yáng)性,可判定該受試樣品通便功能動(dòng)物實(shí)驗結果陽(yáng)性。