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長(cháng)期毒性試驗-藥物安全性評價(jià)
一、簡(jiǎn)介
長(cháng)期毒性實(shí)驗是指實(shí)驗動(dòng)物連續多日解除較大劑量的藥物所引起的中毒效應,為觀(guān)察這種中毒效應而設計的毒理學(xué)實(shí)驗稱(chēng)之為長(cháng)期毒性試驗。目的是通過(guò)重復給藥的動(dòng)物實(shí)驗表征受試物的毒性作用,降低臨床受試者藥物風(fēng)險。
在藥物開(kāi)發(fā)的過(guò)程中,長(cháng)期毒性試驗的目的是通過(guò)重復給藥的動(dòng)物試驗表征受試物的毒性作用,預測其可能對人體產(chǎn)生的不良反應,降低臨床試驗受試者和藥品上市后使用人群的用藥風(fēng)險。
長(cháng)期毒性試驗的最終目的是為臨床試驗和臨床用藥服務(wù)。具體包括以下五個(gè)方面:
①預測受試物可能引起的臨床不良反應,包括不良反應的性質(zhì)、 程度、劑量-反應關(guān)系和時(shí)間-反應關(guān)系、可逆性等;
②判斷受試物反復給藥的毒性靶器官或靶組織;
③推測臨床試驗的起始劑量和重復用藥的安全劑量范圍;
④提示臨床試驗中需重點(diǎn)監測的指標;
⑤還可以為臨床試驗中的解毒或解救措施提供參考。
二、試驗方法
長(cháng)期毒性試驗總體原則為:
①選用兩種試驗動(dòng)物——至少在兩種動(dòng)物體上進(jìn)行兼顧雌雄性別;
②三個(gè)劑量——劑量至少分為高、中、低三個(gè)檔次,高劑量組應能充分反映藥物的毒性而低劑量組不出現毒性反應。同時(shí)設一溶劑或賦型劑對照組或已知藥物毒性對照組;
③給藥途徑應與臨床擬用途徑相同。
2.1 實(shí)驗動(dòng)物模型選擇
試驗動(dòng)物應選擇正常、健康和未孕的動(dòng)物,動(dòng)物體重差異應在平均體重的 20%之內。最為理想的是選用與人類(lèi)代謝相似、對藥物敏感的動(dòng)物,在數量上應能滿(mǎn)足試驗終止后統計學(xué)處理的要求,并備有部分動(dòng)物供停藥后觀(guān)察其毒性反應的可逆性。
實(shí)驗動(dòng)物種類(lèi):4-9周齡大鼠(SD、Wistar)、4-9月齡犬(比格犬)。
分組及數量:按照不同LD50計算方法設計動(dòng)物分組一般為4-6組,大鼠每組10-30只,犬類(lèi)大型動(dòng)物每組6只,每組均雌雄各半。
2.2 給藥劑量設計
藥物劑量:根據LD50 設置高中低三個(gè)劑量,大鼠高劑量為1/10 LD50 ,中劑量為1/50 LD50 ,低劑量為1/100 LD50 。犬劑量為大鼠一半。
給藥周期:根據藥物臨床療程不同,設置不同給藥周期。例如1個(gè)月長(cháng)毒試驗支持臨床II期用藥時(shí)間不超過(guò)2周的藥物,3個(gè)月長(cháng)毒試驗支持臨床用藥時(shí)間不超過(guò)4周的藥物等等。
2.3 給藥途徑選擇
通常選擇臨床擬用途徑。
三、觀(guān)察指標
試驗前,嚙齒類(lèi)動(dòng)物至少應進(jìn)行 5 天的適應性觀(guān)察,非嚙齒類(lèi)動(dòng)物至少應馴養觀(guān)察 1~2 周,應對實(shí)驗動(dòng)物進(jìn)行外觀(guān)體征、行為活動(dòng)、攝食量和體重檢查,非嚙齒類(lèi)動(dòng)物還至少應進(jìn)行 2 次體溫、心電圖、血液學(xué)和血液生化學(xué)指標等的檢測。此外,實(shí)驗動(dòng)物相關(guān)指標的歷史背景數據在長(cháng)期毒性試驗中也具有重要的參考意義。
試驗期間,應對動(dòng)物進(jìn)行外觀(guān)體征、行為活動(dòng)、攝食量、體重、 糞便性狀、給藥局部反應、血液學(xué)指標、血液生化學(xué)指標等的觀(guān)測。 非嚙齒類(lèi)動(dòng)物還應進(jìn)行體溫、心電圖、眼科檢查和尿液分析。應根據試驗周期的長(cháng)短和受試物的特點(diǎn)確定檢測時(shí)間和檢測次數。原則上應盡早發(fā)現毒性反應,并反映出觀(guān)測指標或參數的變化與給藥期限的關(guān)系。
給藥結束后,應對動(dòng)物(除恢復期觀(guān)察動(dòng)物)進(jìn)行全面的大體解 剖,主要臟器應稱(chēng)重并計算臟器系數,并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。