常見(jiàn)問(wèn)題解答

一 細胞污染的種類(lèi)。

細胞培養污染一般可分為微生物污染和真核生物污染。其中微生物污染包括真菌和酵母、細菌、支原體等。真核生物通常是細胞系之間的交叉污染。

細菌、真菌或酵母的污染容易識別，可以通過(guò)培養基的顏色變化和顯微鏡下的觀(guān)察直接判斷。例如細菌污染后細胞培養基變黃，鏡下有小黑點(diǎn)，運動(dòng)規律。酵母污染后，培養基變紫，鏡下透明，連成一串圓形。但是，如果是支原體污染的話(huà)，最初支原體生長(cháng)緩慢，顯微鏡下很難看到，很難發(fā)現。

真核細胞污染是指一種細胞污染另一種細胞，主要發(fā)生在操作不當，特別是在長(cháng)期研究某些細胞系時(shí)。目前，越來(lái)越多的研究人員發(fā)現了細胞間污染這一被忽視的問(wèn)題。據不完全統計，約15-20%的細胞被細胞間污染。

二 細胞培養污染對實(shí)驗的影響。

無(wú)論發(fā)生哪種污染，都會(huì )產(chǎn)生相同的結果。也就是說(shuō)，必須重新做實(shí)驗，浪費工作時(shí)間，增加實(shí)驗成本，降低實(shí)驗重復性。并且在污染細胞和未污染細胞的基礎上進(jìn)行試驗時(shí)，可能會(huì )得到完全不同的試驗結果。更嚴重的是，如果你研究的細胞是另一種細胞，所有的工作都可能不一樣。

當前，關(guān)于細胞污染的報道越來(lái)越多。期刊《The Scientist》發(fā)表了Megan Scudellari 撰寫(xiě)的題為 A case of mistaken identity 的文章，文中指出現已發(fā)表的 650 多項研究中所用的乳腺癌細胞可能并不是真正的乳腺癌細胞。

三 避免細胞培養污染的方法。

1） 正確的移液工具

如果移液操作不當，分裝樣品可能會(huì )受到污染。因此，選擇合適的細胞培養移液管和高質(zhì)量的耗材是保證分裝樣品清潔度的保證。與實(shí)驗室常用的雙鍵吸管相比，單鍵吸管可以更好地減少氣溶膠污染，因為單鍵吸管撞擊吸盤(pán)時(shí)活塞不需要反彈，直接按壓

 2）具有生物安全柜功能的濾芯吸頭

除吸管外，使用濾芯吸頭可減少氣溶膠污染。首選雙濾芯吸入頭。它有兩層過(guò)濾元件和不同的孔徑，以確保超高的阻隔效率。濾芯性能符合en 1822標準（空氣過(guò)濾等級），并具有HEPA E12過(guò)濾性能

 3）使用培養瓶培養細胞，尤其是帶有透氣蓋的培養瓶。與培養皿或培養板相比，只有培養瓶口可以與外界連接，減少了外界氣體和微生物與培養細胞的接觸，降低了污染的可能性。帶有濾膜的透氣瓶蓋能更有效地防止細菌、病毒和支原體的污染

 4）水浴設備應清潔保養良好

水是主要污染源之一。使用水浴設備進(jìn)行細胞復蘇時(shí)，必須注意防止細胞培養細菌或霉菌污染。相關(guān)設備應每周覆蓋并徹底清潔?？梢栽谒≈刑砑右志鷦?，以限制細菌增殖。錐形瓶/樣品管從水浴中取出后應進(jìn)行有效消毒。相比之下，金屬浴可以提供無(wú)污染的溫度控制條件。金屬浴的恒溫設備比水浴的恒溫設備更能有效地控制污染。

（5）二氧化碳培養箱是細胞培養的關(guān)鍵設備。根據英國癌癥醫學(xué)雜志2014年的《生物醫學(xué)研究中細胞系的使用指南》，對于如何選擇二氧化碳培養箱的標準有明確的建議：

    1 二氧化碳培養箱應采用防銹材料制成，如不銹鋼。其他材料如純銅盒在防止霉菌污染方面也有顯著(zhù)效果。

 2。內罐表面應光滑，無(wú)焊縫，便于清潔

 3。在高溫滅菌前，可完全拆卸擱板和擱板框架進(jìn)行清潔和準備

 4。一些培養箱內置HEPA過(guò)濾器以過(guò)濾內部空氣。然而，只有通過(guò)設計沒(méi)有風(fēng)扇的培養箱，我們才能真正減少由于室內空氣快速流動(dòng)而導致污染物擴散的可能性。

英瀚斯生物，公司自建有標準的細胞培養房，配備有生物安全柜、超凈工作臺、三氣細胞培養箱、二氧化碳細胞培養箱、熒光倒置顯微鏡、體視鏡、酶標儀、流式細胞儀等設備。細胞組技術(shù)人員畢業(yè)于東南大學(xué)、華中科技大學(xué)等知名高校生物學(xué)相關(guān)專(zhuān)業(yè)，具有碩士研究生以上學(xué)歷，熟練掌握細胞學(xué)相關(guān)實(shí)驗，可開(kāi)展多種細胞實(shí)驗。