常見(jiàn)問(wèn)題解答

HE染色與常見(jiàn)問(wèn)題分析

定義

蘇木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱(chēng)HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細胞核內的染色質(zhì)與胞質(zhì)內的核酸著(zhù)紫藍色 ；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著(zhù)紅色 。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。

常見(jiàn)問(wèn)題

一.著(zhù)色過(guò)深或者過(guò)淺

1.染色時(shí)間控制不佳，HE染色需要通過(guò)鏡檢來(lái)控制時(shí)間，可以先通過(guò)預實(shí)驗得到最佳染色時(shí)間，一般情況下新鮮蘇木素染色時(shí)間在1-3min左右，分化時(shí)間同樣不易過(guò)長(cháng)，過(guò)度分化可以水洗后重新復染蘇木素。

二.染色后切片不清晰，霧化，斑點(diǎn)

1.烤片溫度過(guò)低，時(shí)間不夠，導致脫蠟不徹底，切片留存白色斑點(diǎn)，

2.染色后切片脫水時(shí)間不合理，切片上殘留水分，使切片霧化，需要優(yōu)化脫水的梯度乙醇時(shí)間，切片經(jīng)過(guò)低濃度時(shí)時(shí)間要短，向高濃度逐漸延長(cháng)脫水時(shí)間

3.蓋玻片上殘留封固劑，導致切片不清晰，需要重新封片解決

4. 組織標本已發(fā)生自溶或取材后沒(méi)及時(shí)固定或固定液濃度不夠；另固定前干枯標本，染色后易出現灰染現象，很難補救。

5. 固定劑對組織有一定媒染作用，它既可與蛋白結合又能與染料結合，可增強著(zhù)色能力，同時(shí)能沉淀和凝固細胞內成分，使細胞內成分產(chǎn)生不同折光率造成光學(xué)差異。故固定不良是造成切片染色模糊不清的主要原因。

6. 在日常病理制片中淋巴結處理不當造成切片染色后組織見(jiàn)發(fā)灰現象，其主要原因由于細胞密集，結構復雜導致固定液難以滲透到組織深部，從而造成組織中央固定不佳，而出現徹底發(fā)灰現象?？捎玫攘繜o(wú)水乙醇乙醚混合液處理切片5-10分鐘，乙醇洗，水洗，3%硫酸鐵銨溶液補充媒染5分鐘既可。

三.染色后切片有黑色雜質(zhì)，氣泡

1.雜質(zhì)多為蘇木素染色液中的金屬膜粘附于載玻片上，每天染色前仔細過(guò)濾蘇木素染液或者使用半氧化蘇木素染色液

2.染色后切片經(jīng)過(guò)梯度乙醇脫水不徹底，導致封片后載玻片上殘留水分，也可能是封片是出現的氣泡

四.染色后細胞核呈棕色

1.蘇木素染液過(guò)度氧化或者染色后返藍時(shí)間不足，染色前檢查蘇木素的染色能力并即時(shí)更換試劑，然后適當延長(cháng)返藍時(shí)間

五．切片染色不勻

1. 組織取材固定不當，如組織取材過(guò)大或過(guò)厚，不能將組織完全固定，組織切片染色后出現外周固定好的部分易著(zhù)色，而中間未固定好的組織 ，細胞著(zhù)色模糊，使染色不均。在送檢的標本中，及時(shí)用4%中性甲醛對標本固定，固定液應是標本的4倍。大標本應切開(kāi)固定。

2. 切片薄厚不均或有橫紋。切片刀有缺口時(shí)，易造成斷裂，破碎和不完整。切片刀傾角過(guò)大上卷，不能連在一起，過(guò)小則切片皺起?；蛞蚵萁z松動(dòng)產(chǎn)生振動(dòng)切片易造成厚薄不均或技術(shù)人員手臂搖動(dòng)切片機頭力量不均易造成橫紋。切片時(shí)檢查切片機螺母是否擰緊。

3. 組織脫水，透明和浸蠟處理不當，組織脫水用的各級乙醇未能保證相應濃度使組織脫水不徹底，二甲苯內的時(shí)間過(guò)長(cháng)組織易碎也無(wú)法切出好片子，浸蠟溫度過(guò)高，組織變脆也不利切片染色。

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