藥效學(xué)實(shí)驗中心

藥品抗氧化功能 動(dòng)物實(shí)驗評價(jià)方法

1 動(dòng)物實(shí)驗項目

1.1 老年動(dòng)物

選取10月齡以上大鼠或8月齡以上小鼠，按血中MDA水平分組，隨機分為1個(gè)溶劑對照組和3個(gè)供試品劑量組。三個(gè)劑量組給予不同濃度的供試品，對照組給予等體積的溶劑，每天一次，連續30天。實(shí)驗結束時(shí)處死動(dòng)物，測定脂質(zhì)氧化產(chǎn)物含量、蛋白質(zhì)羰基含量、還原型谷胱甘肽含量和抗氧化酶活性。

1.2 D-半乳糖氧化損傷模型

1.2.1 原理：D-半乳糖供給過(guò)多導致活性氧的超常產(chǎn)生，打破了遺傳模型控制的活性氧產(chǎn)生和消除的平衡。引起過(guò)氧化。

1.2.2 造模方法：選用25-30g健康成年小鼠，除空白對照組外，其余動(dòng)物在頸后側皮下或腹腔注射D-半乳糖40mg-1.2g/kg BW制作模型，注射劑量為0.1mL/10g，每日1次，連續造模6周。取血測定MDA，并根據MDA水平分組。隨機分為1個(gè)模型對照組和3個(gè)供試品劑量組。 3個(gè)劑量組口服不同濃度的供試品，模型對照組給予等體積溶劑。在給予供試樣品的同時(shí)，模型對照組和各劑量組分別在頸后皮下或腹腔注射相同劑量的D-半乳糖。實(shí)驗結束時(shí)處死動(dòng)物，測定脂質(zhì)氧化產(chǎn)物含量、蛋白質(zhì)羰基含量、還原型谷胱甘肽含量和抗氧化酶活性。

1.3 乙醇氧化損傷模型

1.3.1原理：大量攝入乙醇，激活氧分子產(chǎn)生自由基，導致組織細胞過(guò)氧化，體內還原型谷胱甘肽耗竭。

1.3.2 建模方法：選取健康成年小鼠25-30g（大鼠180-220g），隨機分為4組，1個(gè)模型對照組，3個(gè)供試品劑量組，必要時(shí)可增設空白對照組。 3個(gè)劑量組給予不同濃度的供試品，模型對照組給予等體積溶劑，灌胃給藥30天。模型組、對照組及3個(gè)劑量組末次灌胃后禁食進(jìn)食16小時(shí)（過(guò)夜）后，50%乙醇12ml/kgBW灌胃1次，6小時(shí)后取標本（空白對照組不處理，標本不讓進(jìn)食），測定血清或肝組織中脂質(zhì)氧化產(chǎn)物和蛋白質(zhì)的含量。羰基含量、還原谷胱甘肽含量、抗氧化酶活性。

2 測試原理

2.1 動(dòng)物實(shí)驗和人體食品試驗所列指標為強制性項目。

2.2 脂質(zhì)氧化產(chǎn)物指標中的丙二醛和血清8-表氫異前列腺素可選用指標測定，動(dòng)物實(shí)驗中的抗氧化酶指標為超氧化物歧化酶和谷胱甘肽。選擇其中一種氧化酶用于指標測定。

2.3 選擇氧化損傷模型動(dòng)物和老年動(dòng)物中的一種進(jìn)行生化指標測定。

3 動(dòng)物試驗結果的判斷

如果化學(xué)產(chǎn)品、蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物、抗氧化酶、抗氧化物質(zhì)四項指標中有三項為陽(yáng)性，則可判定供試品抗氧化功能動(dòng)物試驗結果為陽(yáng)性。