細胞生物學(xué)平臺

細胞運動(dòng)能力檢測



 

細胞運動(dòng)能力
細胞運動(dòng)具有粘附性和趨向性。當細胞受到外界刺激時(shí)，細胞內的粘附趨化因子激活，根據刺激性質(zhì)做出不同的反應，細胞在骨架蛋白的作用下細胞伸出偽足，會(huì )在支撐物上反復的粘附和脫離，向刺激點(diǎn)或者遠離刺激點(diǎn)運動(dòng)。不同的刺激條件下會(huì )有不同的反應，根據細胞對不同刺激的反應，一般使用細胞劃痕實(shí)驗、細胞遷移能力實(shí)驗、細胞侵襲能力實(shí)驗檢測細胞的運動(dòng)能力。
 
細胞劃痕實(shí)驗是體外模擬細胞遷移能力和修復能力快捷的檢測方法。
實(shí)驗流程：
1.1、在六孔板中待細胞長(cháng)滿(mǎn)后，使用移液器槍頭或其他硬物在六孔板中劃1-3條平行的直線(xiàn)，加入PBS輕輕搖晃，去除PBS，重復使用PBS洗5次，以去除劃出的細胞；
1.2、細胞分別培養0h、12h、24h后，觀(guān)察細胞往中線(xiàn)遷移情況，同時(shí)使用ImageJ軟件對劃痕的距離進(jìn)行檢測，以判斷細胞遷移能力。
懸浮細胞不適宜做細胞劃痕實(shí)驗。

細胞遷移和侵襲

實(shí)驗是體外模擬腫瘤細胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養板中，將腫瘤細胞接種于小室中，利用培養液成分的差異誘導細胞運動(dòng)，檢測細胞的遷移和侵襲能力的差異。
實(shí)驗流程：
1 細胞遷移：
1.1、細胞經(jīng)不同刺激后，去除細胞培養基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶將細胞消化后將細胞轉移至離心管中，1000rpm常溫離心5min；
1.2、使用無(wú)血清培養基將細胞重懸，使用血球計數板對細胞計數，接種5×10⁴個(gè)細胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培養基，輕輕混勻后放入培養箱中培養8h；
1.3、去除上室和下室中的培養基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常溫固定細胞10min；
1.4、加入PBS洗2次，加入結晶紫染色液，常溫染色20min，使用棉簽輕輕擦拭以去除未遷移的細胞，加入水或者PBS洗兩次，去除殘留的染色液；
1.5、將transwell小室放在顯微鏡下拍照。
2 細胞侵襲：
2.1、將matrigel放入4℃冰箱融化過(guò)夜，加入預冷的PBS，1:3比例將matrigel稀釋?zhuān)褂妙A冷的移液器將matrigel加入transwell小室上室中，輕輕加入防止出現氣泡，加好后，將transwell小室放入細胞培養箱中凝固30min；
2.2、細胞經(jīng)不同刺激后，去除細胞培養基，加入PBS洗一次，去除PBS，加入胰酶將細胞消化后將細胞轉移至離心管中，1000rpm常溫離心5min；
2.3、使用無(wú)血清培養基將細胞重懸，使用血球計數板對細胞計數，接種1*10⁵個(gè)細胞于transwell小室上室，下室加入10%含血清的培養基，輕輕混勻后放入培養箱中培養24h；
2.4、去除上室和下室中的培養基，使用4%多聚甲醛或者乙醇常溫固定細胞10min；
2.5、加入PBS洗2次，加入結晶紫染色液，常溫染色20min，使用棉簽輕輕擦拭以去除未遷移的細胞和殘留的matrigel，加入水或者PBS洗兩次，去除殘留的染色液；
2.6、將transwell小室放在顯微鏡下拍照。

結果示例：

圖 A 細胞劃痕實(shí)驗圖；B，C 細胞遷移和侵襲實(shí)驗圖